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外泌体miRNA在小儿急性淋巴细胞白血病中的作用研究

李健1,2, 李阳1, 温钧翔1, 徐锦1

1.复旦大学附属儿科医院
2.上海市出生缺陷防治重点实验室

目的: 急性淋巴细胞白血病(ALL)是儿童最常见的造血系统恶性肿瘤,发病率高,病因复杂,预后差。本研究通过对ALL患者血清外泌体miRNA进行表达筛选及功能分析,并研究其对白血病细胞生长周期的影响,旨在为ALL后续机制研究提供实验依据和新的切入点,并为ALL临床诊疗提供新的靶标。
方法: 选取2016年10月-2017年10月在我院血液科确诊为ALL的患儿共13例,其中男6例,女7例,年龄1-7岁,平均年龄4.5岁。并随机选取同一时间段在我院门诊体检的健康儿童13例,年龄性别与病例组尽量匹配。采集ALL患者及健康对照者外周血,分离血清,提取外泌体。利用RNA-seq 分析ALL患者与健康儿童血清外泌体miRNA 表达谱特征,并利用qRT-PCR 对差异表达miRNA 进行扩大样本验证。利用生物信息学工具对差异表达miRNA进行靶基因预测及功能分析,并利用流式细胞仪技术检测差异表达miRNA对人白血病T淋巴细胞-Jurkat细胞周期的影响。
结果: 我们的研究结果表明,miRNA并非血清外泌体中含量最丰富的小RNA。我们在正常儿童及ALL患者血清外泌体中分别发现了363及 463 个miRNA,其中在ALL患者外泌体中特异表达的miRNA共132个,健康对照组中特异表达的外泌体miRNA共32个。qRT-PCR 扩大样本验证显示 miR-370-3p, miR-493-3p, miR-432-5p 及 miR-409-3p在 ALL患者血清外泌体中表达显著下调。功能及信号通路分析表明:差异表达miRNA的靶基因主要参与细胞增殖、迁移、分化及粘附过程,并且主要富集在肿瘤相关信号通路中,包括MAPK, NF-κB, Wnt及mTOR信号通路。流式细胞仪技术检测发现 miR-493-3p可诱导Jurkat细胞周期阻滞在G2/M期。
结论: 我们发现了一些在ALL患者血清外泌体中差异表达的miRNA,对其功能进行初步探讨提示外泌体miR-493-3p可能通过影响白血病T淋巴细胞周期进而参与ALL的发生。这一研究有助于理解外泌体在ALL中的作用,并推动外泌体在小儿ALL临床诊疗中的应用及发展。