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王达利:MSCs对瘢痕塑形期增生性瘢痕形成的影响研究 PPT讲座视频 中华医学会烧伤外科学分会2017年学术年会暨第二十五届全军烧伤外科学专业学术会议
标题: MSCs对瘢痕塑形期增生性瘢痕形成的影响研究
讲者: 王达利
单位: 遵义医学院附属医院
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论文摘要: 目的 探讨MSCs对增生性瘢痕角质形成细胞、成纤维细胞及两者间上皮-间质交互作用的影响,为将MSCs转化应用于临床增生性瘢痕的防治提供实验研究资料。方法 采用机械分离及酶消化法提取成人废弃包皮真皮来源MSCs(hDMSCs),兔脂肪来源干细胞(ADSCs),取生长状态良好的第3代细胞,绘制生长曲线,采用流式细胞仪检测hDMSCs的CD分子,免疫细胞化学检测角蛋白19和波形蛋白,成脂、成软骨和成骨细胞诱导分化对hDMSCs进行鉴定,获取临床上6个月、1年、2年三个时期的增生性瘢痕标本各3例,在体外将异体hDMSCs与增生性瘢痕形成不同时期的成纤维细胞通过非接触式Transwell共培养体系培养2l d,采用RT—PCR和Western Blot技术检测共培养后不同时期增生性瘢痕成纤维细胞α-SMA和核心蛋白多糖(decorin,DCN)的mRNA和蛋白的表达变化情况。兔第3代ADSCs采用诱导成骨、成脂进行初步鉴定后标记用于自体移植。制作兔耳增生性瘢痕模型,于创面上皮化后(建模25d左右),实验组取BrdU标记的自体ADSCs(5×106/ml)0.2ml环形注射于6只大耳白兔左耳瘢痕内(软骨上层),每5天注射一次,共注射3次。对照组用PBS缓冲液0.2ml同法注射于右耳瘢痕内。记录增生性瘢痕的大体外观,HE及Masson染色其组织结构变化,免疫荧光染色示踪移植的干细胞, ELISA检测瘢痕模型中Ⅰ、Ⅲ型胶原、TGF-β1及DCN蛋白表达情况,免疫组化检测瘢痕组织内上皮-间质交互影响相关因子IL-1α、KGF、 CK10、PCAN的表达变化, RT-PCR检测瘢痕组织内IL-1α、TGF-β1、DCN在瘢痕组织中表皮层及真皮层的表达水平。
结果  分离培养的hDMSCs符合间充质干细胞的最低鉴定标准。与对照组相比, hDMSCs共培养处理后的成纤维细胞中α-SMA mRNA及蛋白表达降低,DCN mRNA及蛋白表达增高,差异均有统计学意义(P<0.05)。且提示以增生性瘢痕形成早期即6个月组变化明显。兔第3代自体ADSCs成脂诱导培养21d时行油红O染色,可见脂滴处呈红色,成骨诱导培养21d行茜素红S染色,可见红色钙化结节。兔耳创面上皮化平均时间为建模20±2天,对照组瘢痕于建模第35±2天增生最为明显。建模40d,对照组仍维持较明显的增生,而实验组瘢痕体积缩小、变平,质地变软、色泽稍变浅。HE染色结果显示,实验组上皮细胞层数增多,可见上皮脚样及真皮乳突样结构形成,对照组上皮层较薄,未见上皮脚样及真皮乳突样结构形成。Masson染色实验组显示胶原密度下降,间隙增宽,排列较整齐,染色较淡。对照组及模型组蓝染的胶原纤维排列紊乱,呈旋涡状,大量胶原沉积,密度较实验组明显增加。ELISA结果显示实验组Ⅰ、Ⅲ型胶原及TGF-β1的表达较对照组下调(P<0.05),DCN表达量较对照组上调(P<0.05)。荧光结果显示实验组中真皮层可见红色荧光,提示ADSCs局部移植后可在体内存活。免疫组化结果显示与对照组及模型组相比,实验组瘢痕组织内IL-1α、KGF、DCN表达上调,TGF-β1、Ⅰ、Ⅲ型胶原表达下调(P<0.05),Ⅰ/Ⅲ型胶原比值下降;实验组表皮层(角质形成细胞)CK10、PCAN表达明显上调(P<0.05)。RT-PCR结果显示与对照组与模型组相比,实验组瘢痕组织内TGF-β1mRNA表达下调, IL-1αmRNA表达上调, DCN mRNA表达上调。
结论 
hDMSCs在体外培养体系中可通过下调瘢痕组织成纤维细胞的α-SMA的表达、上调DCN的表达改变瘢痕成纤维细胞的功能,具有防治创面纤维化形成的生物学效应,且此作用可能对增生性瘢痕形成早期的成纤维细胞作用较明显。在创面上皮化后的瘢痕塑形早期,瘢痕内局部移植兔自体ADSCs,能够通过干预创面塑形期的上皮-间质交互影响,诱导角质形成细胞增殖分化,改善成纤维细胞的功能,促进创面再生愈合。

烧伤整形

遵义医科大学附属医院

职务/职称: 副院长

 

个人简介:烧伤整形外科学科带头人,贵州省医学会烧伤整形外科学会主任委员,中华医学会烧伤外科学分会常委,中华医学会组织修复与再生医学分会常委,中国医师协会烧伤外科学分会常委,《中华损伤与修复杂志》副总编、《中华整形外科杂志》、《中华烧伤杂志》编委等。

 

 


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