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邹立津:体外长期培养的家猪骨髓间充质干细胞发生转化过程中表达谱和甲基化谱关联分析 PPT讲座视频 中华医学会烧伤外科学分会2017年学术年会暨第二十五届全军烧伤外科学专业学术会议
标题: 体外长期培养的家猪骨髓间充质干细胞发生转化过程中表达谱和甲基化谱关联分析
讲者: 邹立津
单位: 南昌大学第一附属医院
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论文摘要: 目的  骨髓间充质干细胞(MSCs)具有促进伤口愈合并具有分化为表皮细胞的潜能,在皮肤组织工程应用中显示出广阔的应用前景。研究表明,MSCs长期培养会导致恶性转化。本研究探讨长期培养的家猪骨髓间充质干细胞全基因组DNA甲基化状态,阐明甲基化在调节基因表达上与MSCs发生转化的关系。  方法  选取3月龄家猪6头,无菌条件下胫骨近端抽取骨髓。采用密度梯度离心法并根据细胞贴壁特性对MSCs进行分离、纯化、体外传代培养。使用Illumina450k甲基化芯片和Agilent全基因组表达谱芯片进行差异基因筛选,通过生物信息学分析获得第1代MSCs(早期)和第24代MSCs(晚期)全基因组甲基化表达水平和mRNA表达谱,并进行mRNA-甲基化的关联分析。结果  全基因表达谱芯片筛选出转化过程中上调表达的257条基因和下调的315条基因,信号通路分析发现部分细胞周期相关基因表达上调,部分ECM-receptor interaction、Focal adhesion、Regulation of actin cytoskeleton、Pathways in cancer、p53等通路相关基因表达下调;甲基化芯片分析得到受甲基化调控的962条差异基因和1219条受去甲基化的基因,并发现这些基因主要参与细胞代谢、增殖分化、细胞结构、炎性免疫、肿瘤发生等生物过程;采用DNA甲基化芯片和基因芯片联合分析MSCs转化过程受甲基化调控的基因,发现35个基因的甲基化改变与表达变化方向相反,其中21个基因启动子区甲基化程度升高而基因表达下降,14个基因启动子区甲基化程度下降而基因表达升高;同时KEGG信号通路GO分析发现多个受甲基化调控、参与干细胞分化的基因及参与的多个细胞信号通路,其中在12条甲基化下调而表达上调的基因中,很多具有调节肿瘤发生与免疫炎性相互平衡的作用,其中CDKN3启动子区甲基化状态改变,可能与细胞肿瘤化密切相关。  结论  甲基化与MSCs发生转化有关。

烧伤科

南昌大学第一附属医院

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