60例精神发育迟滞/发育迟缓患儿的遗传学分析

目的: 精神发育迟滞（mental retardation,MR）和（或）生长发育迟缓（developmental delay,DD）是儿科常见的发育障碍性疾病，患儿以精神发育迟滞（MR）、生长发育迟缓（DD）、矮小、特殊面容为主要临床表现。MR/DD的病因既有内在的遗传因素也有外在的环境因素，其中遗传因素是导致其发生的重要原因之一，约有30%-60% 的MR/DD是由遗传因素导致的，包括各类染色体异常、单基因或多基因突变及先天性代谢缺陷病等，而且由遗传因素致病的中-重度MR/DD患者可达65%^[1]。 MR/DD病因复杂，临床表现多样化，为疾病的临床诊断带来困难，本研究运用染色体核型分析和染色体微阵列分析（chromosomal microarray analysis, CMA）技术，对60例MR/DD患儿进行遗传学病因分析，探讨MR/DD的发病机制，了解染色体异常和基因CNVs与疾病表型的相关性

方法: 通过染色体核型分析对患儿进行初步的病因分析，抽取静脉血 3 ml，肝素钠抗凝，接种于人外周血染色体培养基（青岛莱佛生物）中，放入37℃ 恒温箱中培养72 h，常规方法收获细胞，制备中期染色体标本；将标本在胰酶溶液中消化16秒，姬姆萨染液染色38分钟，在显微镜（油镜）下进行染色体G-显带核型分析。每个受检者计数 30个细胞，分析 5个核型；对嵌合体和有异常核型者计数 100个细胞，分析 10个核型，结果按人类细胞遗传学国际命名体制 ( ISCN 2009) 的标准命名。染色体核型分析未能明确病因的患儿，再采用CMA技术检测患儿基因组拷贝数变异（genomic copy number variants, CNVs），CMA染色体微阵列分析的具体方法过程，包括DNA的准备、DNA消化、引物连接、PCR、纯化、片段化、标记、杂交、洗染及扫描。提取患儿EDTA抗凝血2-4 ml，用Tiangen公司的TIANamp Blood血液基因组DNA提取试剂盒提取全血基因组DNA，采用美国Affymetrix®公司的Cytescan®HD Array Kit and Reagent Kit Bundle试剂盒制备样本DNA并加入CytoScan750K芯片，在美国Affymetrix®公司的CytoScanTM Assay 8平台上进行洗染和扫描，应用Affymetrix® Chromosome Analysis Suite (ChAS)芯片分析软件进行数据分析，得出CNVs。利用国际数据库分析CNVs的致病性。

结果: 60例MR/DD患儿中，检出11例（18.3%）患儿存在染色体异常，均为常染色体异常，其中常染色体数目异常5例，结构异常6例。染色体核型正常的49例患儿经CMA分析后，发现4例患儿存在CNVs，1例CNVs涉及13q33.1-34区域微缺失，考虑为13q微缺失综合征；1例CNVs涉及1p36.33-36.31微缺失，考虑为1p36微缺失综合征；1例CNVs涉及5q35.1-35.31微缺失，考虑为Sotos综合征；1例CNVs涉及5q14.3区域重复，临床意义不明。