纳米硒负载利巴韦林经Caspase-3通路抑制H1N1流感病毒感染

目的: 利巴韦林(RBV)是广谱抗病毒药物。纳米硒(SeNPs)作为药物载体在生物医学领域被广泛研究。本文旨在验证经利巴韦林修饰纳米硒后其抗流感病毒效果是否增强。

方法: 合成纳米硒负载利巴韦林纳米体系，通过透射电镜、元素组成分析、粒度及电位分析进行理化性质表征。在体外实验中，MDCK细胞经H1N1流感病毒感染后，用RBV、SeNPs、Se@RBV分别处理细胞，通过MTT实验检测细胞存活率，收集培养上清检测病毒毒力；检测Caspase-3活性；通过Western blot检测Caspase-3、PARP、Caspase-8、p53、Bax等蛋白的表达。在体内实验中，BALB/c小鼠经经H1N1流感病毒感染后，用RBV、SeNPs、Se@RBV分别处理，取小鼠肺组织进行HE染色、TUNEL检测、免疫组化检测，镜下观察肺组织损伤情况，以及Caspase-3通路蛋白表达情况。

结果: 本文以利巴韦林修饰纳米硒，得到新型纳米药物系统(Se@RBV)，并经透射电镜、元素分析、粒度及电位分析证实该纳米药物具有粒径小、稳定的理化特性。体外实验中，用RBV、SeNPs、Se@RBV 分别处理经H1N1流感病毒感染的MDCK细胞，MTT实验证实经Se@RBV处理组具有更高的细胞存活率。荧光标记实验说明Se@RBV进入胞内后定位于溶酶体，随后释放到胞质中发挥生物学功能。体内实验发现，经Se@RBV处理的H1N1病毒感染的BALB/c小鼠肺组织在HE染色下可见肺泡损伤较轻，TUNEL检测证实DNA断裂减弱。通过体外Western blot及小鼠肺组织免疫组化分析证实，H1N1流感病毒感染后Caspase-3凋亡通路被激活，经Se@RBV处理后，Caspase-3活性降低、蛋白表达减少，此外PARP、Caspase-8、Bax、p53的激活均下调。